细胞增殖论文汇总十篇

时间:2023-03-29 09:18:20

序论:好文章的创作是一个不断探索和完善的过程,我们为您推荐十篇细胞增殖论文范例,希望它们能助您一臂之力,提升您的阅读品质,带来更深刻的阅读感受。

细胞增殖论文

篇(1)

人乳铁蛋白(HumanLactoferrin,hLF)是主要存在于人乳清中的球蛋白,乳汁别是初乳中含量最高,具有广谱抗菌、抗病毒、抗肿瘤等作用。国外有学者将其应用于肿瘤患者的治疗,但是对其作用机制的研究较少。目前国内较少有关于hLF作用于细胞的报道,我们选用易早期转移的鼻咽癌(NPC)细胞作为研究对象,以中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人肝脏细胞(L02)作为正常细胞对照,观察hLF在体外是否具有抑制癌细胞生长的作用,探讨hLF抗肿瘤的作用机制,从而为肿瘤的治疗提供研究基础,为临床实验及应用提供新的理论依据。

一、材料与方法

1.1材料人鼻咽癌细胞(CNE)、中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人肝脏细胞(L02)均购自中国科学院上海细胞资源中心。重组hLF(Lot:L0520,溶于PBS中,储存浓度5mg/ml,-20℃储存备用)和噻唑蓝(MTT,Lot:M2128)均购自Sigma公司。RPMI1640、胎牛血清购自HyClone公司。其他试剂均为分析纯。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养各细胞系均应用含10%胎牛血清和1%青链霉素的RPMI1640培养基,5%CO2,37℃培养。

1.2.2MTT法检测细胞增殖设空白对照组和hLF干预组。待细胞生长至对数生长期,接种于96孔细胞培养板,接种数为5×104/孔。每组细胞设5个平行孔,各组细胞分别加入不同浓度的hLF(0,1.25×10-3,2.5×10-3,5×10-3,10×10-3,20×10-3,40×10-3g/L),每孔均为200μl。作用24h后,加入MTT(5g/L,每孔20μl),继续培养4h,测定A570nm吸光度。

1.2.3细胞形态观察细胞经hLF处理后,倾去上层悬浮死细胞并用PBS洗两遍,加入新鲜培养基。同样处理对照孔细胞,将细胞置于倒置显微镜下,观察细胞形态的变化。

1.3统计学处理数据用x±s表示,组间比较用方差分析。

二、结果

2.1重组hLF对鼻咽癌细胞CNE、人肝脏细胞L02、中国仓鼠细胞CHO系的增殖能力的影响对CNE呈现剂量依赖性的抑制作用,而对正常细胞无抑制作用。人乳铁蛋白对各细胞体外增殖的影响与空白对照比较:1)P<0.05

2.2细胞形态学观察显微镜镜下可见,空白对照组癌细胞密集成片生长,如铺路卵石状,细胞膜圆润,透明,颗粒较少,细胞间界限清楚,并可隐约见到细胞核。hLF处理组癌细胞形态发生明显的改变,随hLF浓度增加,细胞从正常的增殖旺盛的贴壁生长,逐渐表现为生长缓慢,黏附力降低,细胞变圆,细胞胞质粗糙,细胞内颗粒逐渐增多,且透明度降低,立体感较差,细胞形态完整性受损,而正常细胞在细胞镜检图hLF作用下无显著变化。

三、讨论

hLF多种生物学功能通过免疫系统的激活与调节得以实现。Bezaul研究发现,乳铁蛋白能抑制鼠实体瘤的生长和转移。肿瘤内注射LF,可以明显的减小实体瘤的体积,且作用效果与LF干预天数相关。研究发现,乳铁蛋白的抗头颈部肿瘤作用是通过抑制肿瘤细胞增殖实现的。Wolf等发现,人乳铁蛋白通过阻断头颈部肿瘤细胞由G0到G1期的转化来抑制肿瘤细胞的增殖。人乳铁蛋白对鼠的SCC细胞系生长的抑制作用,与剂量成正相关;而且人乳铁蛋白抑制头颈部细胞癌的作用是通过直接的细胞毒作用及系统性的免疫调节作用实现的。

Varadhachary等人做了大量的口服临床试验,证实乳铁蛋白无药物相关的有害作用。鼻咽癌作为头颈部肿瘤之一,其恶性程度较高,早期即可出现颈部淋巴结转移,临床上有转移至骨盆、肺、肝等多器官的病例。选用鼻咽癌细胞作为研究对象,具有一定的代表意义。

本研究结果显示,人乳铁蛋白可以抑制鼻咽癌细胞增殖,且呈剂量依赖性,对正常细胞的增殖无明显抑制作用。这一结果,为开发乳铁蛋白的抗癌功效提供了理论依据。

篇(2)

从近几年的高考来看,命题重点围绕细胞周期中染色体行为和数目变化规律,减数分裂与有丝分裂的比较及图像识别,减数分裂的过程及与遗传的关系。那么学生在这块内容中到底还有哪些未落实到位?又该如何帮助学生有效解决这些问题?

一、典型错误分析

【典例】图为雄果蝇体内某细胞分裂过程中,每条染色体上DNA含量变化(甲曲线)和染色体数目变化(乙曲线)。请据图回答:

(1) CD段细胞中有( )条染色体,DE段有染色单体( )条,FG段细胞中有DNA( )个,DE段可形成四分体( )个。

(2)在A点若用3H标记该细胞的DNA双链,再将其转入不含3H的培养基中

培养,在FG段一个细胞中的染色体总数和被3H标记的染色体数分别为( ) ( )。

(3)若该细胞基因型为AaXbY,在分裂完成后产生了一个AYY的,则另三个的基因型分别为( )( )( )。

(4)该细胞某一条染色体的两条单体相同位点出现不同基因的变化可发生在( )段。

该题考查目标:有丝分裂与减数分裂的曲线辨析,减数分裂中染色体、DNA、单体的数目变化规律,染色体、DNA、脱氧核苷酸链之间的关系,及减数分裂与生物变异的联系。通过学案反映出学生存在以下几方面的问题:

1.基础知识不扎实,记忆不牢,知识点混淆。例如:在第(1)小题中学生由于把果蝇染色体数4对记成了4条从而造成CD段错写为含4条染色体。由于不明确四分体的概

(3)纠错补偏,反思内化。有一句教育的真理“世界上最有价值的习题不是专家出的习题,而是自己做错的习题”。二轮复习抓错题相当机的导航灯一样,它可以帮我们指明前进的方向。学生在一轮复习中已做了大量试题,经历了多次模拟考试,难免出现许多错误,若能指导学生将这些错误进行分类整理,就会发现反复出错的地方就是自己知识上的薄弱环节,这时就可针对性地翻阅书本,结合书本来解决知识漏洞,当然有些错误可能是学生不注意使用生物科学术语回答,画图表、写实验设计不规范严谨等造成的,通过纠错也可有效提醒学生对自己这方面问题的关注。

二轮复习不做题不行,但沉迷于题海也不行,关键要提高做题质量。总结归纳常见题型的解题规律、方法技巧,从而达到弄懂一道题,旁通一类题的目的。也可通过演练近几年的高考真题亲身感触高考题的命题思路、设问方式,从中感悟解题技巧。

3.消除情感梦魇,增强自信。 美国著名心理学家Robert Rosenthal曾做过这样一个实验:他从某个班级的花名册中随意挑选了几个名字,并且告诉老师这些学生经过测试智商较高。之后,老师便关注并鼓励他们,这些学生也由于有了自信而努力学习。八个月之后,那些“高智商”的学生的成绩竟有了惊人的进步。这个实验证实了自信的重要性。那么如何增强学生对考试的自信,以实现从容应考呢?

(1)充分的考前准备:多数学生都有这样的体会:“一看到考题不难,紧张不安的情绪便会随之减少,脑子不再麻木,思维也变得灵活了。”因此,考前一定要做好知识与技能双重准备,并针对考试中可能出现的复杂情况,进行有目的的训练,做到胸有成竹,考试当然也充满信心。

篇(3)

 

葛根素(Puerarin)是葛根中具有异黄酮结构的主要活性成分之一,有研究表明,葛根素具有预防骨质疏松的作用 [1]。本文观察了葛根素在成骨-破骨细胞共育体系中对大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响, 以评价其对骨代谢的作用。

1材料

1.1动物普通级1日龄Sprange-Dawley(SD)新生大鼠和5日龄SD新生大鼠,由南方医科大学实验动物中心提供,合格证号:2008B006。

1.2药物葛根素 广东省药品检验所 批号: 180752-200809。

1.3试剂DMEM培养基(GIBCO公司),0.25%胰蛋白酶(Amersco公司),Ⅱ型胶原酶(Sigma公司),碱性磷酸酶试剂盒(Sigma公司)。

1.4仪器超净工作台(苏州净化设备厂产品),倒置相差显微镜(Nikon产品),CO2培养箱(ThermoForma公司产品),细胞培养板(Costar公司产品), 0.45μm过滤膜(Costar公司产品),紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)。论文格式。

2方法

2.1分离培养OB 参照文献[2]。

2.2分离培养OC 参照文献[2]。

2.3共育体系的建立

在已制作好并消毒的24孔共育培养板,以3×104个/孔的密度将OB接种到OB培养室内,以3×104个/孔的密度将OC接种到OC培养室内,每20min观察一次OC贴壁情况,同时观察是否有细胞透过半透膜进入OC培养室。

2.4MTT法测定葛根素对OB增殖的影响

取第三代OB以3×104个/孔的密度接种于OB 培养室,3h后,将新分离的OC以3×104个/孔接种于OC培养室;24h后换入无血清培养液,待细胞周期同步化后,更换为不同浓度的葛根素培养液。各剂量组的终浓度分别为0.05ug/ml、0.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、50ug/ml、100ug/ml。每个浓度设6个复孔。分别培养7天,更换无血清的DMEM培养基400ul,同时加入5mg/mL的MTT80ul/孔,置37℃,5% CO2培养箱中孵育4h后,在酶标仪上测OD值,波长为570nm。参比波长为630nm。论文格式。

2.5PNPP法检测葛根素对OB ALP活性的影响

取第三代OB以5×104个/孔的密度接种于OB培养室,3h后,将新分离的OC以5×104个/孔接种于OC培养室;待细胞周期同步化后,再分别加入0.5μg/ml、5μg/ml、50μg/ml的葛根素,与空白组对照。培养7d后,加入500ul 0.1%TritonX-100作用30min, 收集细胞裂解液,采用ALP试剂盒检测其活性。

3结果

3.1葛根素对成骨细胞增殖的影响

在共育体系中,成骨细胞在5~100μg/ml的葛根素中培养7d后产生促明显的增殖作用。其中以100μg/ml促增殖作用最强。而0.05μg/ml、0.5μg/ml的葛根素作用无明显差异。见表1。

篇(4)

   

苍术(Rhizoma atratylodes)为菊科植物南苍术Atractylodes lancea ( Thunb.) DC.或北苍术Atractylodes chinensis Koidz.等的干燥根茎。苍术性辛、苦、温,归脾、胃、肝经,具有燥湿健脾、祛风散寒、明目作用。主治脘腹胀满、泄泻、水肿、风湿痹痛、风寒、感冒等[1]。

    

苍术在中医临床中使用十分广泛。已有研究发现苍术挥发油增加去卵巢雌性大鼠的骨钙含量(闫雪生《苍术油软胶囊的研制》。山东中医药大学硕士学位论文,2002),但对苍术挥发油是否影响成骨细胞的增殖,尚未见报道。本实验研究苍术挥发油对成骨细胞UMR-106的增殖作用。

1  材料与方法

1.1  材料

苍术药材购自上海德康药业有限公司,经中国第二军医大学药学院生药教研室黄宝康副教授鉴定为苍术Atractylodes lancea (Thunb.) DC.的干燥根茎。

1.2  试剂

DMEM 培养基(Cibco);3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基-四唑氢溴酸盐MTT(Sigma);胎牛血清FBS(杭州四季青生物工程材料研究所);胰蛋白酶(Cibco);其它试剂均为国产分析纯。

1.3  方法

1.3.1  挥发油样品的制备水蒸气蒸馏法:将药材样品粉碎过40目筛,精确称取200 g的苍术,加水浸泡1 h,然后用挥发油提取器按常规水蒸气蒸馏,提取直至挥发油的量不再增加,蒸馏液用正己烷萃取,萃取液用无水硫酸钠干燥,过滤,微热蒸去溶剂得挥发油样品,挥发油样品为淡黄色透明油状物,具有刺激性气味。取50 mg挥发油样品溶于1 ml二甲基亚砜中,用灭菌过的0.2 mm 滤器( Gelmann Sciences) 除菌,并于4℃保存,备用。临用时用DMEM培养液稀释至所需浓度。

1.3.2  成骨样细胞UMR-106的培养[3]UMR-106 (大鼠成骨肉瘤细胞系) 细胞株获赠于江苏镇江医学院病原生物教研室,源于美国麻省医学院。将UMR-106细胞培养于10%胎牛血清(100KU/L青霉素,100 mg/ml链霉素)的无菌DMEM培养基中,置37℃,5%CO2培养箱中进行培养。取生长状态良好的细胞,用0.25%胰蛋白酶消化,加含胎牛血清的培养基制成细胞悬浮液,调整细胞浓度为5×106个/ml接种于100 ml培养瓶中,二氧化碳培养箱中孵育,2~3 d换液1次。

1.3.3  MTT 法测定细胞的增殖[2]取对数生长期细胞消化计数后,用含血清的DMEM 细胞培养液将细胞浓度稀释至1×105个/ml ,铺入96孔细胞培养板中(100 μl/孔)培养24 h后加入含不同浓度挥发油(每个浓度6孔)的无血清DMEM培养。结束培养4 h前弃去培养液,每孔加入20 μl MTT(5 mg/ml,用PBS配制)继续孵育4 h,有蓝紫色沉淀生成,每孔加入150 μl二甲基亚砜(DMSO) ,振荡10 min待沉淀完全溶解,用酶标仪以550 nm 为测定波长、650 nm为参比波长测定吸光值,以不加中药的细胞孔测得的吸光值为空白,用t检验进行各加药组与空白组之间均值的比较。细胞增殖率的计算如下:

    

增殖率(%)= Ai实验组- Ao对照组Ao对照组×100%

    

Ai:不同条件下的吸光值;Ao:空白组的吸光值

2  结果

2.1  MTT 法测定细胞增殖与吸光度的关系将UMR-106细胞分别以6个不同浓度(1×105~1.2×106个)铺入96 孔板,培养8 h贴壁后,用上述方法测定每孔吸光度(Y),与细胞数目(X)作线性回归,得标准曲线方程:Y=0.054+0.092 6×10-6X(r=0.986 0,n=6),两者具有良好的线性关系。见图1。

2.2  挥发油对细胞增殖的作用用1,0.1,0.01,0.001 mg/ml 4种浓度的挥发油作用于细胞24 h,在λ=550 nm测定其吸光值。结果见表1 。表1  不同挥发油浓度对UMR-106的增殖作用(略)

苍术挥发油浓度0.001 mg/ml时培养24 h,可明显促进细胞的增殖,细胞的增殖率为10.44%。在低的浓度下对细胞增殖有轻微的抑制作用,表明挥发油短期内使用低浓度较好。

    

为了观察挥发油促细胞增殖的最适宜的作用时间,用浓度为0.001 mg/ml的苍术挥发油作用于细胞分别为24,48,72 h , 在λ=550 nm测定其吸光值。结果见表2。表2  不同作用时间对细胞增殖的影响(略)

由表2可见,当挥发油在浓度为0.001 mg/ml作用24 h时能明显刺激UMR-106增殖,在近48 h时增殖率为20.96%, 达到最强,72 h 时细胞数目又下降。

3  讨论

    

苍术挥发油在0.001 mg/ml浓度下作用24,48 h,均对UMR-106增殖有明显的促进作用。UMR-106大鼠成骨肉瘤细胞系从形态和性质上都保留了成骨细胞独有的特征, 并且具有稳定、均一、纯度高等优点。 因此,UMR-106 细胞作为一种国际公认的成骨细胞系可以用来代替成骨细胞[3]。在骨形成最初阶段的成骨细胞增殖期, 成骨细胞数量增多, 形成多层细胞并合成、分泌I型胶原以便最终矿化形成骨结节。成骨样细胞的增殖与细胞培养液中药物的成分有关, 与成骨样细胞UMR-106共同体外培养的方法可能作为对骨形成有促进作用的活性化合物的筛选模型, 经过进一步的动物体内实验从这些活性药物中追踪对骨形成有促进作用的活性成分。因此,以成骨样细胞UMR-106 的增殖为活性指标,观察了苍术挥发油对该细胞系增殖的作用。由于采用的是苍术挥发油和细胞共同体外培养的方法,推测苍术挥发油中含有直接刺激成骨样细胞增殖的成分,为苍术治疗骨质疏松症提供初步筛选,具体机制有待进一步研究。

篇(5)

【Key words】 Rapamycin; Liver transplantation; Cold preservation; Reperfusion; Biliary epithelial cells; Proliferation

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器

兔抗增殖细胞核抗原多克隆抗体、鼠抗pSTAT3tyr705单克隆抗体均购自美国Santa Cruz公司;ChemMateTM Envision免疫组化试剂盒为丹麦Dako公司产品;RPM为美国惠氏百宫制药公司惠赠。

1.3 各组术后生存分析

1.4 肝功能指标检测

1.5 兔抗增殖细胞核抗原、α平滑肌肌动蛋白免疫组织化学检测

肝组织常规固定、包埋、切片。采用兔抗增殖细胞核抗原作为细胞增殖期G1S期的评价指标,α平滑肌肌动蛋白作为肌纤维母细胞标志。按ChemMateTM Envision免疫组化试剂盒说明书操作。显微镜下观察α平滑肌肌动蛋白表达阳性细胞的胞质呈棕色,增殖细胞的胞核呈棕色。计算7个高倍镜(×400)视野内,每100个胆管细胞中增殖的胆管上皮细胞所占比例的均值作为该样本的胆管上皮细胞增殖率[4]。

1.6 统计学分析

计量资料以±s表示,所有数据应用SPSS 10.0软件进行统计分析,多组均数间的比较采用单因素方差分析,采用KaplanMeier法绘制生存曲线,Logrank法检验各组生存率之间的差异。

2 结果

2.1 各组术后生存分析

冷保存12 h组生存率明显低于冷保存1 h组(P=0.017 4),而与雷帕霉素组水平接近(P=0.89,图1)。两组大鼠死亡的主要原因为移植肝肝功能不全,表现为肝脏淤血或伴有局灶性坏死,腹水、黄疸,肝功能酶谱升高,部分死亡大鼠胆管内可见褐色胆泥形成。

图1 各组肝移植术后生存曲线

2.2 各组肝功能检测

2.3 各组胆管上皮细胞增殖

2.4 胆管周围肌纤维母细胞分布

图2 肝移植术后胆管上皮细胞增殖(红色箭头所示为增殖细胞) (2氨基联苯胺染色 ×400)

图3 肝移植术后肌纤维母细胞分布(红色箭头所示为肌纤维母细胞) (2氨基联苯胺染色 ×400)

3 讨论

残存的胆管上皮细胞在对损伤做出再生修复时,虽然最终能恢复到近似原先的细胞形态,但在该过程中极有可能经历DNA损伤或基因序列改变,具有和正常细胞不同的功能,分泌多种与器官纤维化密切相关的细胞因子如TGFβ等,促进胆管周围成纤维细胞活化转化为肌纤维母细胞,而后者的持续出现是器官纤维化过程的关键[6]。同时,大量而活跃的细胞分裂需要消耗较多的能量,就有可能削弱肝内非新生细胞正常的能量代谢过程[7]。这对移植物的长期存活及功能是不利的。我们观察到伴随着明显的胆管上皮细胞增殖,较多肌纤维母细胞环绕于冷保存12 h组胆管周围。这表明严重冷保存再灌注诱导的胆管上皮细胞增殖可能是促进肌纤维母细胞聚集的重要因素。由于胆管上皮细胞和胆管周围肌纤维母细胞之间维持着非常精妙的平衡,冷保存再灌注对胆管上皮细胞的严重损伤触发肌纤维母细胞的大量活化,导致胆管壁创面收缩,增加了胆管壁及其周围组织纤维化和胆管狭窄形成的风险,在肝外胆管或肝内大胆管常表现为管腔狭窄,在小胆管则可能出现管腔阻塞[8]。我们还观察到大胆管尤其肝门附近大胆管内壁的胆管上皮细胞增殖最为活跃,该区结缔组织丰富,内含大量成纤维细胞,极易受到胆管上皮细胞增殖的影响而活化为肌纤维母细胞。这也许正是临床观察到的肝门附近大胆管成为移植肝胆道狭窄易患部位的原因之1,也是影响移植物功能与存活的重要因素。

作为1种新型免疫抑制剂,体外和体内实验均证实雷帕霉素抑制胆管上皮细胞增殖,其有效抑制浓度远低于临床肝移植术后患者应用雷帕霉素作为免疫抑制剂时的血药浓度[9]。我们的研究也发现,雷帕霉素明显抑制由冷保存再灌注损伤诱导的胆管上皮细胞增殖,并减少胆管周围肌纤维母细胞的聚集。雷帕霉素是信号转导及转录激活因子3活化的特异性抑制剂,因而部分阻断转录激活因子3介导的信号通路,从而调控细胞周期进展,影响细胞增殖与分化[10],这可能是其抑制胆管上皮细胞增殖的分子机制之1。同时我们还观察到,雷帕霉素虽然明显抑制肝移植术后胆管上皮细胞的增殖,但并未降低术后14 d内生存率,进1步提示以胆管上皮细胞增殖为靶点的雷帕霉素极可能成为临床防治移植肝胆管周围纤维化、胆管狭窄等并发症的有力武器,将会更广泛地应用于肝移植领域。

【参考文献】

篇(6)

摘要:骨骼肌损伤是一种常见的运动创伤,但是骨骼肌自然愈合时间一般较长,而且这种修复一般是不完全的;如何加快其愈合

过程成为运动医学领域中迫切需要解决的问题。肌卫星细胞(muscle satellite cells)于1961 年被 Mauro 等首次在蛙骨骼肌中发现,这种

具有增殖和自我更新能力的成肌前体细胞被认为是骨骼肌修复中不可或缺的细胞。在骨骼肌损伤后,骨骼肌卫星细胞会被激活,然后

卫星细胞进行增殖、分化、并与损伤部位的骨骼肌纤维融合,从而修复受损的骨骼肌。

关键词:肌卫星细胞;激活;增殖;迁移;综述文献

方法:利用计算机检索PubMed数据库20年之内的相关文献,

检索词为“skeletal muscle satellite cells”或“skeletal muscle

regeneration”,纳入标注:具有原创性的研究性论文,目的方法

具有代表性。排除标准:重复性研究以及代表性不强的文献。

1.前言

对于骨骼肌损伤的机制并没有一致认同的结论,目前一般认

为骨骼肌损伤后修复包括三个时期:坏死组织的清除、修复期和

塑形期。在骨骼肌损伤后的修复期中,卫星细胞是关键性的细胞。

在生长因子和受损肌纤维释放的信号作用下,位于损伤部位周

围、处于静息状态下的卫星细胞被激活,然后迁移至骨骼肌损伤

部位,通过增殖、分化,形成新的肌管并与肌纤维融合,从而完

成骨骼肌的修复。因此弄清卫星细胞的激活、迁移、增殖和分化

等一系列细胞行为,才能够为骨骼肌损伤后积极的治疗和合理的

康复提供帮助和借鉴。

2.文献综述提炼

2.1 卫星细胞的激活

早期的研究认为骨骼肌卫星细胞的激活可能与一系列自分

泌/旁分泌因子有关,如 IGF-I,FGF 和 HGF 等。也有研究表明,

NO 和 Notch 信号在骨骼肌卫星细胞的激活过程中起着重要的作

用。当骨骼肌卫星细胞处于静息状态下时,骨骼肌中的 NOS(一

氧化碳合成酶)可以合成 NO,而 NOS 在运动、机械刺激或者肌

肉损伤后会进行上调,增加 NO 的释放,从而激活骨骼肌卫星细

胞。骨骼肌组织在 NO 作用下,能够引起雌激素抑制剂(Follistatin)

的表达,它可以抑制肌肉生长抑制素(Myostatin)的表达,而

Myostatin是一种骨骼肌形成的负向调节因子。Wozniak和Anderson

等发现在敲除 NOS 的 mdx 鼠体内,卫星细胞激活的比例会明显

上升,揭示骨骼肌卫星细胞的静息状态可能依靠 NO 维持的。在

骨骼肌损伤后,Notch 的配体(Delta)表达上调,从而激活骨骼

肌卫星细胞。Notch 配体与其 Notch-1 受体在静息的骨骼肌卫星细

胞处相结合,激活肌肉转录调节因子。在骨骼肌损伤、卫星细胞

激活后,对抗 Notch-1 作用的 Numb 蛋白表达将下降。在体和离

体实验研究证明,Notch 信号在维持骨骼肌的形态方面起着重要

作用,调节着骨骼肌卫星细胞的细胞周期。

NO 和 Notch 信号在骨骼肌卫星细胞的激活过程中都有着重

要的作用,然而,在骨骼肌卫星细胞的激活过程中它们确切的引

发机制是什么?它们是如何进行平衡调节的?这些目前还没有统一

的定论。

2.2 卫星细胞的迁移

目前对于卫星细胞的迁移相关文献的报道较少,不过 IGF-1

和 MGF 等生长因子可以促进卫星细胞的迁移,但是其机制还需

要进一步研究。在对成骨细胞迁移的研究中发现:JNK 信号传导

通路和 P38、ERK 激酶可以促进成骨细胞的迁移,抑制 Akt 蛋白

的磷酸化,会削弱成骨细胞的迁移效果;敲除 PTEN 基因,发现

成骨细胞的迁移效果显著提高,而 PTEN 基因抑制 PI3K 信号传

导通路。那么影响卫星细胞迁移的信号通路是否跟成骨细胞的信

号通路有相似之处呢?因此,对于影响卫星细胞迁移的信号传导

通路还需要进一步的研究才能得到证实。

2.3 卫星细胞的增殖分化

在肌卫星细胞发育过程中,可以观察到Myf5和MyoD的表达,

并且在 Myogenin 和 MRF4 的作用下发生终末分化,形成肌管,最

后发育为成熟的骨骼肌。肌卫星细胞在静息状态下,可以观察到

Pax7 的表达;同时在受到电刺激后出现的 Pax7 的表达显示卫星

细胞重新回到静息状态下。这些研究结果都表明 MRFs 和 Pax7

调控着骨骼肌卫星细胞的分化。

在一定程度上各种生长因子也对卫星细胞的增殖和分化进

行着调控。IGF-I 能够促进骨骼肌卫星细胞增殖和分化,同时,

还影响 MRFs 的功能;FGF 能够促进骨骼肌卫星细胞的增殖,且

在达到最佳状态后增殖能力保持不变;HGF 促进骨细胞增殖,但

是抑制肌卫星细胞的分化;血小板源性生长因子(PDGF),能

促进骨骼肌卫星细胞的分化;转化生长因子β (transforming

growth factor beta,TGF-β)可能抑制骨骼肌卫星细胞的增殖和分

化。

3.结论

3.1 NO 和 Notch 信号在骨骼肌卫星细胞的激活过程中有重要

的作用。

3.2 IGF-I 等生长因子会影响卫星细胞的迁移,但是具体机制

还未研究清楚。

3.3 骨骼肌卫星细胞在修复受损骨骼肌的过程中主要受到

Pax 和生肌调节因子的影响,各种生长因子也在一定程度上影响

着卫星细胞的增殖和分化。

参考文献:

[1]Relaix,F.and P.S.Zammit,Satellite cells are essential for

skeletal muscle regeneration:the cell on the edge returns centre

stage.Development,2012.139(16):p.2845-2856.

[2]王琼.IGF-Ⅰ 与 MGF 对骨骼肌卫星细胞增殖及迁移的

影响,上海体育学院,2011.

篇(7)

1 材料和方法

1.1 材料

4~8周龄SD大鼠(军事医学科学院动物中心提供),L-DMEM培养基、胎牛血清(Gibco公司,美国),胰蛋白酶(Amresco 公司,美国),格列美脲标准品、甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl te-trazolium,MTT)(Sigma公司,美国),兔抗大鼠GLUT-1抗体(sc7903)(Santa Cruz公司,美国),兔抗大鼠GLUT-3抗体(ab41525)(Abcam公司,美国),氟-18标记的脱氧葡萄糖(18F-deoxyglucose,18F-FDG)(中国总医院PET中心)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠下颌骨成骨细胞的分离培养及鉴定 取4~6周龄的成年SD大鼠,颈拉断处死后,在75%乙醇中浸泡5 min,无菌取出带有肌肉和筋膜的下颌骨,置于75%乙醇中洗5~10 s后,在5.25%NaClO中浸泡1 min,用PBS冲洗3次,完全剥离肌肉和筋膜,拔除牙齿,将下颌骨用咬骨钳剪碎成2 mm×2 mm的骨片后,PBS缓冲液反复冲洗至骨碎块呈白色,将其置入小培养瓶中,再加0.25%胰蛋白酶和0.1%Ⅰ型胶原酶的混合液[专业提供写作论文和论文写作服务,欢迎您的光临dylw.net](1∶1),在水浴振荡器中37 ℃、140 r·min-1消化8 min。消化6次后终止,收集第2~5次消化液,经200目不锈钢筛网过滤并离心,去除上清后用含20%胎牛血清的L-DMEM重悬细胞,接种于培养瓶中在37 ℃、5%CO2、饱和湿度条件下于恒温孵箱中静置培养40 min,差速贴壁,纯化成骨细胞。经酶消化后的组织块,再次剪碎至1 mm×1 mm,铺于培养瓶中倒置培养,4 h后翻瓶,待细胞长满传代。取状态良好的第3代细胞用于实验。采用ALP染色、细胞矿化结节染色、细胞Ⅰ型胶原(collagenⅠ,Col Ⅰ)免疫组化染色和骨钙素(osteocalcin,OCN)免疫荧光染色法对细胞进行成骨细胞鉴定。

1.2.2 实验分组 将成骨细胞以每毫升1×105个接种于35 mm平皿中(n=6),每孔加液量为2 mL,细胞生长至融合后,无血清培养基孵育24 h,分别予以5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖处理细胞,持续24 h,加入10 ?mol·L-1 格列美脲干预120 min,然后进行葡萄糖摄取实验。实验分组:5.5 mmol·L-1组(生理浓度葡萄糖,对照组)、5.5 mmol·L-1+格列美脲组、16.5 mmol·L-1组(高浓度葡萄糖)、16.5 mmol·L-1+格列美脲组。

1.2.3 葡萄糖摄取的测定 培养结束后,弃去培养基,用温PBS清洗3遍,每孔加入1 mL含7.5 μCi·mL-1 18F-FDG的PBS,37 ℃孵育30 min,用预冷的PBS冲洗6遍,加入1 mL PBS刮取细胞,收集细胞悬液,用共形γ计数器测定总放射性计数。用总放射性计数与蛋白质浓度的比值,反应细胞葡萄糖摄取能力。

1.2.4 GLUT-1和GLUT-3免疫细胞化学染色 将第4代成骨细胞接种在盖玻片上,培养7 d后用95%乙醇固定,PBS洗涤,加兔抗大鼠GLUT-1、3(1︰100),保湿,4 ℃过夜;PBS洗涤,加生物素化羊抗兔二抗,PBS洗涤;DAB显色,苏木素复染,封片。

1.2.5 Western blot检测GLUT-1、3的表达 将成骨细胞以每毫升1×105个接种于25 cm2培养瓶中,细胞生长至融合后,无血清培养基孵育24 h,分别予以5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖处理细胞,持续24 h,然后加入10 ?mol·L-1格列美脲干预120 min,实验分组同葡萄糖摄取测定实验,Western blot实验用12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sul-fate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)凝胶,300 mA恒流电转移80 min,加兔抗大鼠GLUT-1(1︰2 000稀释)、GLUT-3 抗体(1︰1 000稀释)37 ℃孵育4 h,洗膜后,经辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG(1︰4 000稀释)孵育50 min,化学发光法显示抗原抗体复合物,X线片显影并定影,采用Labworks4.5成像分析仪系统测定所有杂交信号条带密度,用蛋白目的条带水平与β-actin的比值表示。以上实验至少重复3次。

1.3 统计[专业提供写作论文和论文写作服务,欢迎您的光临dylw.net]学处理

采用SPSS 13.0统计软件对数据进行分析,对各组结果进行方差分析和t检验,P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 原代细胞及传代细胞的形态学观察

在倒置显微镜下,组织块上酶消化下的细胞经差速贴壁后,24 h培养可贴壁,细胞呈三角形、纺锤形和多角形等多种形态(图1A)。连续组织块法分离成骨细胞培养第5天可见成骨细胞自骨碎片移出,向周围呈无序生长(图1B),传代细胞在4 h内贴壁,展开的细胞呈长梭形、鳞片形、多边形,细胞核呈圆形或椭圆形,轮廓清晰,可见1~3个核仁。细胞长满瓶底时,多呈梭形或立方形,排列紧密,生长突相互连接(图1C)。随着培养时间的延长,成骨细胞可呈重叠生长。

2.2 成骨细胞的鉴定

光镜下,ALP 染色可见细胞质内有红棕色颗粒或块状颗粒(图2A);ColⅠ表达均呈阳性,蛋白染色主要位于细胞质,表达量丰富(图2B);长期培养,细胞复层生长逐渐形成小结,随着胶原 堆积和钙盐沉积,最后形成不透光的矿化结节,经茜素红染色呈红色块状沉淀(图2C);OCN免疫荧光染色结果显示,细胞呈阳性反应,细胞质OCN染成绿色(图2D)。

2.3 格列美脲对成骨细胞葡萄糖摄取的影响

在5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖作用下,成骨细胞的葡萄糖摄取量分别为1.00±0.06、0.88±0.04。与

5.5 mmol·L-1葡萄糖相比,16.5 mmol·L-1葡萄糖浓度下成骨细胞的糖摄取能力降低了11.67%(P<0.05)。加入格列美脲后,在5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖作用下,成骨细胞的葡萄糖摄取量分别为1.35±0.05、1.10±0.06。格列美脲能够明显提高5.5、16.5 mmol·L-1葡萄糖浓度下成骨细胞的糖摄取能力,分别提高了34.68%和25.17%(P<0.05)。

2.4 GLUT-1和GLUT-3的免疫化学染色

免疫化学染色结果显示GLUT-1、3在不同浓度葡萄糖培养下的成骨细胞中表达均呈阳性,蛋白主要位于细胞质,表达量丰富(图3、4)。

2.5 格列美脲对成骨细胞GLUT-1和GLUT-3的影响

与5.5 mmol·L-1葡萄糖相比,16.5 mmol·L-1葡萄糖增加了成骨细胞GLUT-1蛋白的表达(P<0.05)。格列美脲能明显提高5.5和16.5 mmol·L-1葡萄糖浓度下GLUT-1蛋白的表达(P<0.05)(图5)。

3 讨论

在要求种植牙的患者中,糖尿病患者占有一定的比例。随着糖尿病的发病率逐渐增加,这部分患者的比例也在增加。在糖尿病患者中,异常的高糖状态可以引起骨量减少或者骨质疏松,是种植牙失败的一个重要原因[专业提供写作论文和论文写作服务,欢迎您的光临dylw.net][11]。在这一病理过程中,成骨细胞扮演重要的角色。高糖环境除了影响细胞的增殖分化,也影响葡萄糖摄取过程。对于胰岛细胞[1]、血管平滑肌细胞[2]、绒毛膜细胞[3]、肾小管细胞[4],高糖环境均可降低了细胞的糖摄取能力。笔者观察了120 min时成骨细胞糖摄取的变化,发现高糖环境下成骨细胞的糖摄取要显著低于低糖环境。

葡萄糖是维持细胞能量代谢和生命活动的重要原料,葡萄糖是一种极性分子,不能以自由扩散的方式通过细胞膜脂双层结构的疏水区,除了小肠和肾小管可以通过主动运输方式吸收葡萄糖外,其他组织的细胞都必须通过细胞膜上的GLUT来摄入葡萄糖。GLUT是一类镶嵌在细胞膜上转运的载体蛋白质,它广泛分布于体内各组织。根据转运葡萄糖的方式分为两类,一类是钠依赖的葡萄糖转运蛋白(sodium rely on glucose transporters,SGLT),以主动方式逆浓度梯度转运葡萄糖;另一类为易化扩散的GLUT,以易化扩散的方式顺浓度梯度转运葡萄糖,其转运过程不消耗能量。易化扩散的GLUT是由至少13种膜蛋白组成的一个蛋白质家族。研究发现,成骨细胞样UMR-106细胞系[12]和关节软骨细胞[13]中表达GLUT-1、3,本研究证实大鼠成骨细胞也表达GLUT-1、3。

GLUT-1是已知分布最广的转运体,其高效表达于人类红细胞、脑、眼、周围神经及胎盘等组织中,维持基础状态下组织的葡萄糖摄入。GLUT-3和GLUT-1一样在很多细胞中都有表达,但以脑组织中分布最多。GLUT-3也是具有高亲和力的高效转运蛋白,Km值极低,对于不能储存糖原却又对葡萄糖有很高需要量的组织来说,GLUT-3便成为理想的葡萄糖运载体[14]。

研究[15-16]发现高糖环境可以影响GLUT-1的表达,但结论不统一。据报道高糖可以促进肾小球系膜细胞和视网膜内皮细胞GLUT-1的表达,却降低绒毛膜细胞和肾小管细胞GLUT-l的表达[3-4]。研究[17]发现,高糖环境提高了成骨细胞GLUT-1蛋白的表达。笔者的研究结果也证实高糖环境上调成骨细胞GLUT-1蛋白的表达。有研究[18]表明细胞外糖浓度升高导致渗透压的改变,引起系膜细胞的GLUT-1表达的升高。因此,葡萄糖浓度的改变,导致渗透压改变是成骨细胞GLUT-1表达升高的重要原因。笔者也发现在高糖环境中,成骨细胞GLUT-3的表达是轻微下调的,这与其他研究[18]结果一致,即高糖环境导致视网膜内皮细胞GLUT-3的下降。GLUT-3是高效转运蛋白,它的转运效率是GLUT-1的3倍,本实验中总的糖摄取是下降的,原因可能是高糖环境下GLUT-3的轻微下调,就能影响成骨细胞糖摄取的改变。

胰岛素能促进UMR-106细胞和关节软骨细胞GLUT-1、3的表达,也能促进成骨样细胞的糖摄取增加[12-13]。而格列美脲不仅能作用于胰岛β细胞,也能作用于机体的其他细胞[8-10],产生一系列的类胰岛素信号样作用[9-10]。它能够上调大鼠的脂肪细胞和骨骼肌细胞GLUT-1、4的表达[9-10]。本研究结果证实格列美脲在2种糖浓度下提高了成骨细胞糖摄取,并且上调了GLUT-1、3的蛋白表达。结果提示格列美脲在成骨细胞也可[专业提供写作论文和论文写作服务,欢迎您的光临dylw.net]能发挥类胰岛素样所用。格列美脲对成骨细胞GLUT-1、3蛋白的促进作用受到了16.5 mmol·L-1葡萄糖浓度的抑制,这说明高糖环境降低了格列美脲促进成骨细胞GLUT-1、3蛋白表达的敏感性。笔者前期研究已经证实格列美脲能够促进大鼠下颌骨成骨细胞的增殖分化和矿化[19],葡萄糖作为维持细胞能量代谢和生命活动的重要原料,推测格列美脲对糖摄取的影响可能发挥了相关的作用,其相关性还待进一步研究。

[参考文献]

[1] Unger RH. Diabetic hyperglycemia: link to impaired glu-cose transport in pancreatic beta cells[J]. Science, 1991, 251

(4998):1200-1205.

[2] Pandey NR, Benkirane K, Amiri F, et al. Effects of PPAR-gamma knock-down and hyperglycemia on insulin signaling in vascular smooth muscle cells from hypertensive rats[J]. J Cardiovasc Pharmacol, 2007, 49(6):346-354.

[3] Hahn T, Barth S, Weiss U, et al. Sustained hyperglycemia in vitro down-regulates the GLUT1 glucose transport system of cultured human term placental trophoblast: a mechanism to protect fetal development[J]. FASEB J, 1998, 12(12):

1221-1231.

[4] Park SH, Lee YJ, Lim MJ, et al. High glucose inhibits fruc-tose uptake in renal proximal tubule cells: involvement of cAMP, PLC/PKC, p44/42 MAPK, and cPLA2[J]. J Cell Physiol, 2004, 200(3):407-416.

[5] Hickman J, McElduff A. Insulin promotes growth of the cul-tured rat osteosarcoma cell line UMR-106-01: an osteoblast-

like cell[J]. Endocrinology, 1989, 124(2):701-706.

篇(8)

[论文] 人类胎盘不仅在胎儿—胎盘—母体的关系上起中心轴的作用,而且功能上失调会导致母体和胎儿的病理性变化,随着妊娠的进展,绒毛和滋养层不断成熟和分化,已发现许多物质包括原癌基因产物,在胎盘有生理性的表达。胎儿的发展特征是细胞群增殖和诱导或抑制细胞凋亡成熟起来的,因此,胎盘在妊娠期间也经历着相似的变化。我们通过测定胎盘组织中细胞凋亡调控基因bcl-2、bax及细胞增殖基因ki67,进一步探讨了妊娠高血压综合征(PIH)的病理性变化。

1 资料与方法

1.1 临床资料 随机选择1998年11月至1999年4月白求恩医科大学第二临床医院及长春市妇产医院妇科门诊及产科病房的孕产妇66例。(1)妊高征组36例,平均26.14±3.42岁,平均孕37.44±3.9周,轻度9例,中度10例,重度17例;(2)正常妊娠组30例,孕早期10例,平均25.25±3.80岁,平均孕9.03±1.11周;孕中期5例,平均26.55±3.93岁,平均孕24.05±3.63周;孕晚期(对照组)15例,平均27.76±3.38岁,平均孕39.82±1.32周。

1.2 标本采集及处理 孕早期是行人工流产术者,孕中期是来自无妊娠合并症、并发症,要求终止妊娠而行水囊引产者,孕晚期为单胎足月初产妇,无妊娠合并症、并发症、以自然分娩及择期剖宫产手主结束分娩,其剖宫产指标主要是头盆不称及社会因素。妊高征组孕妇是无慢性高血压、慢性肾炎及其它心肾疾病的病史者。

早孕绒毛组织不需进一步处理,取出后用生理盐水冲洗净,即用10%福尔马林液固定。中、晚期胎盘组织于分娩后立即在母体面(避开钙化、机化灶)随机取3个不同区域约2cm×2cm×2cm胎盘组织,生理盐水冲洗干净后立即放入10%福尔马林固定液中。

1.3 方法 用免疫组化SP法,抗bcl-2、抗bax、抗ki67单克隆抗体即用型及SP试剂盒均购自福州迈新生物工程公司。每次染色均设阳性和阴性对照。

1.4 结果判定 由2名医师独立观察切片中10个高倍视野。(1)阳性标准:SP法显示bcl-2及bax定位于胞浆和胞膜内,反应产物为棕黄色。根据显色程度分为4级:(-)为无着色,(+)为淡黄色,(++)为棕黄色,(+++)为棕褐色;(2)SP法显示ki67以细胞核呈清晰棕褐色为阳性,按阳性细胞占C-cells的比例分为:阳性细胞数<10%为(-);10%-20%为(+);20%-30%为(++);>30%为(+++)。

1.5 统计学分析Fisher精确概率检验法,两组计数资料用等级相关分析。

2 结果

2. 1 正常妊娠期胎盘组织中bcl-2、bax及ki67的基因表达bcl-2表达主要定位在绒毛的S-cells,而bax在S-cells和C-cells均呈阳性,同时在绒毛间质中bax也呈阳性表达,但强度低于滋养层细胞;ki67蛋白主要定位在C-cells。bcl-2在晚期妊娠组的阳性率明显低于早、中期妊娠组(P>0.05);ki67在晚期妊娠组的阳性率明显低于早、中期妊娠组(P<0.01)。早、中、晚期妊娠组bcl-2的表达强度与ki67的表达强度无相关性(P>0.05),bax与ki67也无相关性(P>0.05)。

2 .2 妊高征与正常晚期妊娠胎盘组织中bcl-2、bax及ki67的基因表达bcl-2的阳性率在对照组与PIH两组间差异无显著性(P>0.05),bax两组差异无显著性(P>0.05),对照组ki67的阳性率明显低于PIH组(P<0.01)。bcl-2与ki67的表达强度无相关性(P>0.05),bax与ki67也无相关性(P>0.05)。

2.3 妊高征胎盘组织中bcl-2、bax及ki67的基因表达bcl-2的阳性率在轻、中、重度PIH3组间差异无显著性(P>0.05),bax在3组间差异也无显著性(P>0.05),而ki67在轻度PIH组的阳性率明显低于中、重度组(P<0.01)。PIH轻、中、重度组妊娠bcl-2的表达强度与ki67的表达强度经等级相关分析无相关性(P>0.05),bax与ki67也无相关性(P>0.05)。

3 讨论

3.1 正常妊娠与妊高征胎盘组织bcl-2、bax的基因表达bcl-2是细胞凋亡的重要抑制基因。本研究中免疫组化已确定bcl-2定位在S-cell表达,并且从正常早孕到晚期妊娠持续出现[3,6],因此保留滋养层细胞团可能是维持妊娠的一种机制[1]。晚期妊娠bcl- 2表达下降、可能是因为bcl-2正常生理性功能,在孕晚期组成胎盘的细胞不再需要存活,可能是细胞凋亡的一种早期生物学变化,也可能与分娩有关[2]。

目前已知bcl-2和bax是bcl-2家族中重要成员。bcl-2表达水平较高时,可形成bcl-2和bax的异源二聚体,细胞凋亡受到抑制; bax表达水平较高时,可形成bax-bax同源二聚体,加速细胞凋亡。本研究中,对照组bcl-2与bax的阳性率为66.7%与80%,PIH组的阳性表达均为75%,表明大多数胎盘组织均呈bcl-2与bax高表达。bcl-2和bax表达已在一定水平上达到平衡,所以在胎盘组织中不起介导细胞凋亡的主导作用。

篇(9)

端粒酶抑制剂对于恶性癌症的临床作用,通过近几年来的研究,正逐渐为人所熟悉。其作用机制各有不同,但最终的效用都能够抑制恶性肿瘤细胞的生长与分裂[1]。此类物质包括:反义寡核苷酸,逆转录抑制剂,G-四连体稳定剂,蛋白激酶C抑制剂,化疗药物。

1 反义寡核苷酸(antisense oligodexoynuclectide, ASODN)

反义寡核苷酸能够与靶RNA或DNA特异性互补,能够使得恶性肿瘤细胞端粒酶活性降低,进而其增殖能力下降,甚至调亡。应用这一原理,人工的合成针对模板序列的反义核苷酸抑制剂在研究中已取得很大突破。

例如Mete等[2]使用硫代反义核苷酸(PAS-ODN)对Burkitts瘤中淋巴瘤细胞系OMA-BLI生长有明显的压制作用,导致细胞死亡。此外夏雪梅等[3]对凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸的研究表面,通过使用bcl-2反义寡核苷酸对肺癌细胞株的抑制作用十分显著,可出现肺癌细胞生长抑制以至凋亡,细胞survivin mRNA明显下降。肺癌细胞株survivin基因表达受到survivin反义寡核苷酸的有效抑制。并诱导细胞凋亡和生长延缓,同时也证明联合bcl-2反义寡核苷酸对提升抗癌能力有明显功用。

2 逆转录酶抑制剂(reserve transcripitase inhabitors)

3-叠氮-3-脱氧胸腺核苷(3-azido-2,3-dideoxythymidine, AZT)作为逆转录抑制剂中最为人所关注的一种,其临床价值得到广泛肯定。

吕继博[4]用改良的MTT法测定不同浓度AZT处理C6胶质瘤干细胞及胶质瘤细胞后,在不同阶段的药物敏感性。MTT结果显示,ATZ对胶质瘤干细胞及胶质瘤细胞有着异常强烈的抑制作用,且随着AZT的浓度增加及作用时间的延长,其抑制细胞的增殖作用逐渐增强,有时间-剂量相关关系。通过流式细胞仪检测可得:伴随AZT浓度的增加,胶质瘤干细胞及胶质瘤细胞的S期细胞比例增高,并伴有凋亡细胞的增多。进一步表明AZT作用于S期细胞,抑制C6胶质瘤干细胞的生长,但C6胶质瘤干细胞对AZT存在耐药性,需注意。

3 G-四联体稳定因子

G-四联体稳定因子的作用机制在于特异性的结合于端粒3端由鸟嘌呤折叠形成的四链DNA,既是G-四连体上,从而阻止端粒和端粒酶的结合,抑制其活性。

目前,三乙烯四胺(TETA)的研究有较大进展。殷菲等[5]通过实验证明三乙烯四胺(Triethylene tetramine,TETA)能够与G4-DNA产生相互作用提高其稳定性。TETA能够促进G4-DNA这一有分子间平行特性的分子的形成,继而抑制端粒酶阳性的HeLa、MCF-7、K562、ECV•304及PC12细胞的增殖。作用72 h,TETA对各种细胞的半数 抑制浓度(IC5o值)分别为:HeLa细胞75株,MCF-7细胞124株,K562 细胞175株,EeV-304细胞221株,PelZ细胞452株;而对人体内端粒酶阴性的HLF细胞的增殖则无明显效用。上述研究结果表明TETA的作用机制为:稳定G4-DNA的结构的同时抑制端粒酶活性,以达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。

4 蛋白激酶C抑制剂

蛋白激酶C作为激活细胞活性的重要环节,在信号传导系统中的作用不言而喻。Ku-WC等[6]发现蛋白抑制剂和H-7对鼻炎癌细胞NPC-076端粒酶活性,有很强的抑制作用。

此外,张海泉等[7]发现,通过对星型孢菌素进行结构改造可以得到一系列吲哚马来酰亚胺类化合物,既是一类新型蛋白激酶C抑制剂。采用MTT法对的抗肿瘤活性进行研究,发现吲哚马来酰亚胺类化合物在10 μm浓度下,对人宫颈癌Hela细胞株均表现出不同程度的抑制作用。而对其他肿瘤细胞株,诸如白血病K562等的抑制作用以及其进一步的抗肿瘤活性和作用机理目前尚未彻底阐明。

5 化疗药物

化疗作为癌症治疗的常规手段,对于癌症的治愈有重要作用。顺铂作为一种常用的化疗药物,在临床中广泛使用。何春容等[8]发现顺铂对表达锌指蛋白217(ZNF217)的卵巢癌组织的化疗敏感性呈负相关关系。既是卵巢癌耐药株ZNF217为高表达,而卵巢癌敏感株则为低表达;ZNF217在卵巢癌耐药株中为核表达,但在卵巢癌敏感株则主要为浆表达;此外顺铂可以下调凋亡终末效应酶caspase 3和caspase 9活性,并作用于端粒酶,最终促进卵巢癌组织细胞的凋亡(锌指蛋白217可以抑制这一过程)。

综上所述,以反义核苷酸抑制剂为代表的端粒酶抑制剂,能通过各自不同的作用机制抑制端粒酶的活性,从而最终导致肿瘤细胞的凋亡。这对于癌症的治疗有着显著的临床意义,但例如AZT所存在的耐药性,以及顺铂对于ZNF217的依赖,都影响了它们的作用效果。其工作机制还需进一步阐明。

参 考 文 献

[1] 丁金丽,刘芳芳,于成国.端粒酶抑制剂的研究进展.日本医学介绍,2006,27(10):473-475.

[2] Meta JE, Jashi ss, Palen B, et al. A hexamerie phosphorothloate obligonucleotide telomerase inhibitor arreals growth of Burkitts lymphoma cells in vitro and vivo. Toxicol Appl Plamacol,1997,144(1):189-197.

[3] 夏雪梅,陈余清,蔡应云,等. 调亡抑制基因SURBIBIN反义寡核苷酸联合Bcl-2反义核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的实验观察.中国临床康复,2005,47:140-149.

[4] 吕继博.端粒酶抑制剂AZT对C6交直流干细胞作用的体外实验研究.硕士毕业论文,2010.

[5] 殷菲,碰孝军. 三乙烯四胺与G四链体DNA相互作用、抑制端粒酶活性及抗肿瘤作用研究.大连:大连理工大学,2005.

篇(10)

抗重组人肿瘤坏死因子—α单克隆抗体的研制及其初步应用刘雪松金伯泉(8)

分泌抗rHuIL—6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究杨琨任启生(12)

载脂蛋白B单克隆抗体透射免疫比浊测定法的探讨赵满仓段雪梅(17)

抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析陈伟余模松(21)

鼠抗丙型肝炎病毒ns—5区单克隆抗体的研究刘莹李秀华(24)

用碱性磷酸酶免疫斑点试验检测小鼠血清中的HFRS病毒抗体许辉金伯泉(27)

检测HFRS患者血清IgM抗体的快速ELISA捕捉法的建立及其与常规法…王海涛徐志凯(32)

抗人小细胞型肺癌和抗CD3单克隆抗体的异质交联体的制备及其…韩立军王德斌(35)

抗人胎盘酸性铁蛋白McAb的制备及其鉴定朱慧芬游上游(39)

抗HFRSV鼠/人嵌合抗体基因的构建祝道成李以莞(42)

单克隆抗体组建黄曲霉毒素酶免疫检测试剂盒的研究季永镛陆建华(46)

抗TG单克隆抗体的制备及初步鉴定徐荣佳陈晓英(48)

抗人IL—3McAb杂交瘤细胞系的制备与鉴定黄传书陈常庆(50)

适时应用饲养细胞提高杂交瘤细胞克隆形成率的探索王建六李文锦(51)

两种简易高效的单克隆抗体提纯方法曹军平闫桂玲(52)

用体外免疫的人淋巴细胞研制抗HBsAg单克隆抗体孙佩芳桥爪秀一(54)

用BALB/c与ICR杂交子一代小鼠及新产仔母鼠生产单克隆抗体的观察渠川玫田克恭(58)

CEA单克隆抗体在肿瘤诊断和治疗中的应用及进展宁杨(62)

胃癌单克隆抗体的研究和应用吕同德(65)

肿瘤多药耐药分子单克隆抗体的研究现状李明峰(69)

T-B细胞协作研究的重大突破——滤泡辅T细胞的发现,一个新的CD^4+效应T细胞亚群金伯泉(1)

人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库的构建和鉴定单克隆抗体通讯 陈航方瑾(6)

重组疫苗E.coliLLO/OVA经TLR4和NOD1受体诱导树突状细胞表达细胞因子徐曼戴明桑米粲(9)

体内稳定表达HER2多表位基因B16细胞系的建立李贺向泽敏吴秀丽王莉卫红飞万敏王丽颖(13)

酪氨酸激酶抑制剂A771726阻断IL-13对成纤维细胞的促胶原合成作用熊丽霞李文林石小玉刘卓琦唐洪林(16)

EB病毒转化B淋巴母细胞在汉滩病毒CTL表位研究中的应用王美亮张全华王九平李永明马樱金伯泉(20)

Rapamycin和cyclosporinA对同种排斥过程中TLR5及Foxp3表达的影响陈富强曲莉莉张超梁婷宋静徐佳侯桂华(23)

IL-11保护中子照射后肠上皮损伤的Jak/STAT信号转导机制研究王瑞娟彭瑞云高亚兵常公民徐新萍付凯飞罗庆良(27)

pSG5/NS5A5BC质粒的构建及在Huh7细胞中的表达王雪萍李富军邓琳长野(藤井)基子北山喜久美堀田博(31)

大鼠CD36基因真核表达载体的构建及表达王欣陈莹陈杰(35)

关于《医学索引》/MEDLINE(8)

关于中国精品科技期刊(19)

关于“总被引频次”和“影响因子”(22)

2007年MEDLINE收录论文数较多的高校(30)

2007年MEDLINE收录论文数较多的研究机构(34)

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2007年国内论文数较多的医院(81)

科技动态:一群分泌IL-9-IL-10新的CD4^+T细胞群马樱金伯泉(86)

紫杉醇和顺铂诱导下的凋亡卵巢癌细胞对树突细胞提呈功能影响冯勤梅吴霞王颖葛海良狄文(38)

免疫干预实验性自身免疫性重症肌无力小鼠的B细胞活化机制王蓉杨欢肖波张丽芳(42)

TWEAK诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞合成MMP-3的实验研究夏丽萍肖卫国李俊松丁爽鲁静(46)

顺铂联合exosomes抗小鼠肝癌效应的实验研究汪少华沈宜李静向自武范维珂陈黎(49)

Alzheimer患者血清中抗Aβ42自身抗体的纯化及鉴定段金海徐书雯莫建伟向绍通方运勇汪华侨莫思杰(53)

锁阳提取物对衰老模型鼠免疫功能及自由基代谢的影响刘永琦苏韫吴建军张毅魏舒畅聂蕾颜春鲁(55)

抗体工程钙整合素结合蛋白CIB的原核表达及多克隆抗体的制备与亚细胞定位石洁惠玲张煦王晓辉杨金升吕同德赵治华(58)

抗人骨桥蛋白单克隆抗体的制备及鉴定周群芳鞠吉雨郎景和(62)

人源性抗血小板膜糖蛋白IIb/IIIaFab抗体的研制及其对血小板聚集功能的影响董宁征崔宇杰阮长耿(65)

兔抗凋亡蛋白酶活化因子-1多克隆抗体的制备、纯化与鉴定张文刘胡志军高琰高志涛王辉(68)

糖皮质激素对哮喘豚鼠模型Eotaxin、CCR3表达的调控吕丽丽朱述阳刘平莉(70)

甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1表达的影响李晓东丁新国李英(73)

黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外增殖和细胞周期的影响李林曾耀英黄秀艳宋兵杨志滕菲姚满林(75)

VCC-1真核表达载体的构建及肝癌细胞SMMC7721稳定转染株的建立及鉴定牟霞陈瑶王穗海黄湘李明(79)

CD1d四聚体检测NKT细胞刘景华窦立萍王莉莉于力(82)

iNKT细胞多样性调节机制及其在疾病中的作用陈钰(84)

人类自然杀伤细胞发育研究进展于建渤刘卫平(87)

内皮细胞相关黏附分子的研究进展张宇桑晨庄逢源(89)

抑制性受体LAIR家族的研究新进展马樱陈丽华金伯泉(92)

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗诱导小鼠免疫应答的动态观察周必英陈雅棠李文桂杨梅(99)

四种靶向因子与柯萨奇病毒B3VP1融合基因疫苗免疫效果的比较刘贵霞蓝佳明揣侠高志云金玉怀张永红谢立新(103)

单克隆抗体通讯 SA/mIL15双功能融合蛋白的制备及其生物学鉴定陈艳丽许晓玲唐佳聂小霞宋志纯胡志明高基民(107)

NF-κB抑制剂和IFN-γ对BAFF-R基因启动子活性的影响袁宏香王跃国吴信华倪红兵浦江申娴娟鞠少卿(111)

完全与不完全睡眠剥夺对小鼠免疫功能的影响杨天阳黄燕华蔡昊曼余奇文(115)

ConA对CD4+CD25+调节性T细胞早期活化和功能的影响胡义平李晓娟刘叔文(118)

人泡沫病毒介导IL-24对肿瘤细胞的抑制作用陈思翀姚辰陈芳刘万红陶卫萍李文鑫(121)

小鼠STAT4和STAT6基因酵母双杂交表达载体的构建与鉴定张明香符州田代印王莉佳刘恩梅罗征秀戴继宏(125)

MPP+对原代培养SAMP8小鼠中脑神经元的毒性作用刘静柳建强刘力马琳王彦永马芹颖王铭维(129)

结缔组织生长因子在幼年兔关节软骨全层缺损修复中的表达及意义付建军初同伟周跃刘玉刚(132)

骨髓源性干细胞向慢性马兜铃酸肾病大鼠肾小管上皮细胞分化的研究李维敖然姜红冯江敏(135)

UO-126对HeLa细胞增殖及对FBW7表达的影响孙迪沈宜汪少华向自武谢莹珊姜歆(138)

ASPH在肿瘤细胞和肿瘤组织中的分布及检测宋凯薛小平王伟呼延霆汪桦杨慧谢琼(141)

人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达李冰张军徐俊杰刘树玲付玲李建民陈薇(145)

PCB77人工抗原的合成及多克隆抗体的制备杜瑞雪范仲学郭笃发李广存蔡利娟(149)

放疗分割剂量对食管癌细胞耐药基因表达的影响张广健高蕊张明鑫金鑫梁鹏王健生(152)

PCNA和Caspase-3在肺癌组织中的表达及意义赵阳李晓军隋昕汤小江秦宏任宏(154)

细胞角蛋白7和19在结肠癌中的表达及意义张欣郑鹏生(157)

多发性骨髓瘤患者外周血CD3ε基因的表达特点林春兰陈少华杨力建周羽竝陈思HttP://李扬秋(159)

伊马替尼对慢性粒细胞白血病患者T细胞免疫功能的影响李振宇徐开林(162)

葡萄糖转运蛋白4活性与钙超载后心肌细胞胰岛素抵抗陈焕文李勇刚石应康(164)

强化阿托伐他汀对老年冠状动脉介入后血清MCP-1、hs-CRP和sFas因子的影响问海燕陈宏斌(167)

电刺激对脑梗死大鼠运动功能及骨形成蛋白表达的影响赵丽妹李晓红王栋(169)

体外不同动态力学应变对人牙周膜成纤维细胞整合素α5、α6及β1的表达影响侯睿陈新民巢永烈李小玉(172)

Toll样受体4和巨噬细胞移动抑制因子对血管内皮细胞生物活性的影响王照娟陈龙华梁婷宋静张超侯桂华(175)

人FcγRⅠ受体胞外区基因的克隆、原核表达及纯化苗现伟刘玺张改平席俊张利娜刘运超游雷鸣(178)

人CD4+T淋巴细胞活化相关miRNA的筛选及其靶分子鉴定薛茜郭张燕李伟王涛孟艳玲杨安钢(181)

唾液支原体分别经NF-κB依赖性和非依赖性方式诱导HGEC产生IL-1β、IL-8和表达hBD-2王玉爱刘志杰(184)

脑组织切片免疫组化技术中防止脱片制作方法夏明汗潘晓婷(187)

海洛因依赖者外周血T细胞亚群及NK细胞检测分析刘徽婷王嘉军周永芹张伟(188)

ABO血型鉴定不相符的影响因素及其预防方法张勇萍杨世明田榆曹丽妍(190)

HIV-1Tat疫苗基础研究进展庞强廖文婷潘卫(192)

肿瘤疫苗的研究进展罗军强臧林泉(195)

B淋巴细胞与免疫老化陈昌友朱华亭邱玉华(198)

间充质干细胞作为免疫调节剂用于临床肝移植治疗研究进展王嗣予王福生(200)

幽门螺杆菌alpA基因在乳酸菌中的表达及免疫原性分析孙振璐毕研伟白彩明高丹丹李智华戴宗祥李健峰(203)

人PD-1Δex3基因的克隆、表达及其生物学活性的鉴定胡振华陈永井王勤施毕旻白利雄张学光(207)

天麻素对乙醇诱导肝细胞株L02细胞损伤的影响柏志全胡巢凤孙丽萍(211)

酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制JurkatT细胞增殖毛成全邢飞跃郭中峰方志远(214)

Survivin在小鼠髓源性树突状细胞不同分化阶段中的差异性表达余昆苟欣杨华安周青松仲伟营郑军(217)

葡萄球菌分离株肠毒素sek基因的分布及其蛋白的表达纯化黄金海刘业兵刘莹孙跃辉李琳张丽霞(220)

人EPO基因重组腺病毒载体的构建及表达单克隆抗体通讯 陈邦党马依彤马翔杨毅宁刘芬(223)

葛根素对脂多糖诱导N9小胶质细胞激活的抑制作用白群华李文明刘洪涛陈文娟于超(227)

DO11.10转基因小鼠脊髓损伤后的运动功能恢复王慧郭俊赵宇卞干兰刘芳芳于才勇冯睿(231)

抑制核因子κB与妊娠糖尿病大鼠子宫胰岛素抵抗的关系魏波塔娜李佳张建芳陈必良(235)

哮喘大鼠淋巴液与血液CD4^+CD25^+Treg及IL-10、TGF-β水平比较和地塞米松干预的影响赵志旭冯学斌石涛杨成张立霞(238)

人UNC5CL原白的表达及多克隆抗体的制备和鉴定吕丹钱晓萍田晓军张毓张君(242)

翻译控制肿瘤蛋白TPT1的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用赵一璠李海芳汤石明王萌吴海东刘民李欣(246)

人源抗梭曼过渡态类似物(P6)的抗体筛选王欲晓贾培媛王玉霞乔媛媛杨日芳周丽君(250)

人Fkbp19的多克隆抗体的制备范开吉张彦刘迺发孙强杨晓(253)

抗GBM抗体特异性单链抗体scFv3原核表达载体的构建及表达王雅楠刘章锁邢国兰赵国强肖静王沛(255)

人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶单克隆抗体抗原表位的鉴定及应用单锦露戴楠张沁宏李增鹏曹晓静王东(258)

尼美舒利提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的机制探讨刘军权陈复兴巩新建李慧忠蔡凯张宝福张颂(261)

URG4在肝癌组织中的表达及其与HBx的关系王燕李增山刘杰谢华红(264)

类风湿性关节炎患者外周血Th17/Treg细胞比率失衡的研究牛倩黄卓春蔡蓓王兰兰冯伟华(267)

IL-17A与自身免疫性疾病发病机制的初步探讨陈小奇徐焱成邓浩华孙家忠代喆(270)

系统性红斑狼疮患者血清中β抑制蛋白质-1水平及其与疾病活动性的关系王敬亚王晓非蒋力张晓莉张晶陈涓涓孙小凤(273)

海洛因依赖者急性戒断前后IL-1β、TNF-α、ACTH及CORT含量变化的研究刘徽婷王嘉军(274)

鼻腔及鼻窦内翻性状瘤预后与临床病理免疫组织化学参数的相关性李延辉(276)

D2蛋白酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立苏洁王斌鲁晓晴赵巍闫志勇钱冬萌丁守怡(278)

卵清蛋白雾化吸入诱导肠道菌群失调小鼠肺部过敏反应的发生孙大庆杨锡强刘玮李欣(281)

Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立何志强王胜军薛渊石燕柳迎照仝佳陈建国(285)

锂-匹鲁卡品诱导大鼠癫痫发作后海马齿状回IL-1mRNA表达的变化张世俊李晓伟王莹魏东江文(288)

介导穿孔素短发夹RNA重组腺病毒的构建及其生物学作用赵莉琳刘阳(291)

颈动脉狭窄影响大鼠认知功能及海马神经元凋亡张强寇宏兰晶池英张其梅李耀彩(294)

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